親水作用色譜柱操作建議(CORTECS HILIC、BEH HILIC、BEH Amide)

親水作用色譜柱的使用方法與反相色譜柱有很大的不同，需要加以注意。

1) 樣品制備

應(yīng)盡可能使用較高比例的有機(jī)溶劑(如95%乙腈)，以避免溶劑效應(yīng)。如果存在樣品溶解問題，應(yīng)至少使用50/50乙腈/水，并減少進(jìn)樣體積。

2) 柱平衡

初次使用時(shí)，先用50倍柱體積的50/50乙腈/水(CORTECS HILIC，BEH HILIC，如果流動(dòng)相條件含有緩沖鹽則需添加10 mM流動(dòng)相緩沖鹽)或60/40乙腈/水(BEH Amide)對(duì)柱進(jìn)行老化；

開始進(jìn)樣前，用20倍柱體積的起始流動(dòng)相條件進(jìn)行平衡；

如果使用梯度條件，每次梯度之間，用8-10倍柱體積的起始流動(dòng)相條件再次平衡。

沒有充分老化平衡的色譜柱，將會(huì)出現(xiàn)柱效較低、以及保留時(shí)間漂移的問題。

3) 柱清洗再生

對(duì)于ACQUITY UPLC BEH HILIC與CORTECS HILIC色譜柱，用50/50乙腈/水清洗以去除極性污染物。如果不能解決問題，用5/95的乙腈/水沖洗；

對(duì)于ACQUITY UPLC Amide色譜柱，可采用10分鐘的梯度洗脫從100%有機(jī)相到100%水相。值得注意的是當(dāng)水相比例升高，壓力將迅速增加，當(dāng)水相比例超過60%時(shí)需降低流速。如果有必要可重復(fù)清洗。

4) 柱保存

先將緩沖鹽從色譜柱內(nèi)沖洗干凈，然后將色譜柱保存在95/5乙腈/水(BEH HILIC，CORTECS HILIC)或100%乙腈(BEH Amide)中。